中文名：人核基質蛋白22(NMP-22)ELISA試劑盒
 

　　規(guī)格：48t/96t
 

　　保存：2~8℃
 

　　有效期：6個月
 

　　檢測范圍：0.5U/ml - 20U/ml
 

　　使用目的：本試劑盒用于測定人血清、血漿及相關液體樣本中核基質蛋白22(NMP-22)含量。
 

　　樣本：血清、血漿、細胞上清液、尿液、體液、灌洗液、腦脊髓、心房水、胸房水、組織等。
 

　　特點：敏感性高、特異性強、重復性好、試劑穩(wěn)定、易保存，操作簡便。
 

　　用途：用于測定血清，血漿及相關液體樣本中相關含量或活性。
 

　　種屬：人、大鼠、小鼠、兔子、豬、犬、猴、馬、牛、羊、雞、鴨、魚等。
 

　　運輸方式：現(xiàn)貨供應，一般為快遞運輸，江浙滬隔天到，外地及偏遠地方三至五天時間到貨。
 

　　檢測原理：采用雙抗體夾心ABC-ELISA法。
 

　　實驗原理
 

　　本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人核基質蛋白22(NMP-22)水平。用純化的人核基質蛋白22(NMP-22)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入核基質蛋白22(NMP-22)，再與HRP 標記的核基質蛋白22(NMP-22)抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經過*洗滌后加底物TMB 顯色。TMB 在HRP 酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的核基質蛋白22(NMP-22)呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值)，通過標準曲線計算樣品中人核基質蛋白22(NMP-22)濃度。
 

　　試劑盒組成
 

　　1 30 倍濃縮洗滌液 20ml×1 瓶 7 終止液 6ml×1 瓶
 

　　2 酶標試劑 6ml×1 瓶 8 標準品(32U/ml) 0.5ml×1 瓶
 

　　3 酶標包被板 12 孔×8 條 9 標準品稀釋液 1.5ml×1 瓶
 

　　4 樣品稀釋液 6ml×1 瓶 10 說明書 1 份
 

　　5 顯色劑A 液 6ml×1 瓶 11 封板膜 2 張
 

　　6 顯色劑B 液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1 個
 

　　標本要求
 

　　1.標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融
 

　　2.不能檢測含NaN3 的樣品，因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
 

　　操作步驟
 

　　1. 標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。
 

　　16U/ml 5 號標準品 150μl 的原倍標準品加入150μl 標準品稀釋液
 

　　8U/ml 4 號標準品 150μl 的5 號標準品加入150μl 標準品稀釋液
 

　　4U/ml 3 號標準品 150μl 的4 號標準品加入150μl 標準品稀釋液
 

　　2U/ml 2 號標準品 150μl 的3 號標準品加入150μl 標準品稀釋液
 

　　1U/ml 1 號標準品 150μl 的2 號標準品加入150μl 標準品稀釋液
 

　　2. 加樣：分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5 倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
 

　　3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘。
 

　　4. 配液：將30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水30 倍稀釋后備用
 

　　5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30 秒后棄去，如此重復5 次，拍干。
 

　　6. 加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。
 

　　7. 溫育：操作同3。
 

　　8. 洗滌：操作同5。
 

　　9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色10 分鐘.
 

　　10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(此時藍色立轉黃色)。
 

　　11. 測定：以空白空調零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度(OD 值)。 測定應在加終止液后15 分鐘以內進行。
 

　　計算
 

　　以標準物的濃度為橫坐標，OD 值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據(jù)樣品的OD 值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標準物的濃度與OD 值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD 值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實際濃度。
 

　　注意事項
 

　　1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30 分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。
 

　　2.濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。
 

　　3.各步加樣均應使用加樣器，并經常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5 分鐘內，如標本數(shù)量多，*使用排槍加樣。
 

　　4. 請每次測定的同時做標準曲線，做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本OD 值大于標準品孔*孔的OD 值)，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n 倍)后再測定，計算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。
 

　　5. 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
 

　　6.底物請避光保存。
 

　　7.嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.
 

　　8.所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
 

　　9.本試劑不同批號組分不得混用。
 

　　保存條件及有效期
 

　　1.試劑盒保存：；2-8℃。
 

　　2.有效期：6 個月