運(yùn)用DGGE搜尋未知突變
DGGE 是基于以下原理，即增加聚丙烯酰胺凝膠內(nèi)變性劑的濃度會(huì)熔解雙鏈DNA 的不同區(qū)域。當(dāng)溫度達(dá)到zui低熔解度區(qū)域的熔解溫度Tm 時(shí)，DNA 部分熔解，在凝膠中形成遷移率下降的分支分子（Myers et al.1987）。在均一的運(yùn)行溫度（50—65°C）和尿素與甲酰胺線性變性梯度條件下即形成了變性環(huán)境。梯度以垂直或平行于電泳方向形成。DGGE 是zui靈敏的突變檢測(cè)方法，其效率可達(dá)99%（Grompe 1993）。DCode 系統(tǒng)通過(guò)以下途徑優(yōu)化DGGE：
- 溫度控制模塊提供45–70°C 內(nèi)的*運(yùn)行溫度
- 系統(tǒng)可運(yùn)行2 塊16 x 16 cm 凝膠或4 塊7.5 x 10 cm 凝膠
- 可選擇的MacMelt 或WinMelt 軟件優(yōu)化了GC 夾及引物的置放
DGGE 的兩種模式。A ，凝膠的變性梯度方向與電泳方向垂直。從原生乳腺癌種擴(kuò)增的p53 基因6 號(hào)外顯子的野生型和突變型等位基因通過(guò)垂直DGGE（80V，56°C，2 小時(shí)）分離。感謝AL Borresen, Radium Hospital, Oslo, Norway 提供的數(shù)據(jù)。B ，凝膠的變性梯度方向與電泳方向平行。p53 基因8 號(hào)外顯子的野生型和突變型等位基因在8%丙烯酰胺：甲叉37.5：1 平行梯度（40–65% 變性劑）凝膠上，1 x TAE 緩沖液， 60°C，150 V，電泳2.5 個(gè)小時(shí)。左泳道，突變型等位基因；中，野生型等位基因；右，突變型與野生型等位基因。
DGGE分離示意圖。所示為一個(gè)變性梯度方向與電泳方向垂直的凝膠，以及一個(gè)有單個(gè)熔解區(qū)域的目標(biāo)序列。野生型和突變型樣品加入到制備孔內(nèi)。在低變性劑濃度時(shí)，DNA的片段為雙鏈，但當(dāng)濃度增加時(shí)雙鏈DNA 開(kāi)始熔解，形成分枝分子。到濃度非常高時(shí)，DNA的片段可熔解形成2條單鏈。
運(yùn)用DGGE搜尋未知突變
DGGE 是基于以下原理，即增加聚丙烯酰胺凝膠內(nèi)變性劑的濃度會(huì)熔解雙鏈DNA 的不同區(qū)域。當(dāng)溫度達(dá)到zui低熔解度區(qū)域的熔解溫度Tm 時(shí)，DNA 部分熔解，在凝膠中形成遷移率下降的分支分子（Myers et al.1987）。在均一的運(yùn)行溫度（50—65°C）和尿素與甲酰胺線性變性梯度條件下即形成了變性環(huán)境。梯度以垂直或平行于電泳方向形成。DGGE 是zui靈敏的突變檢測(cè)方法，其效率可達(dá)99%（Grompe 1993）。DCode 系統(tǒng)通過(guò)以下途徑優(yōu)化DGGE：
- 溫度控制模塊提供45–70°C 內(nèi)的*運(yùn)行溫度
- 系統(tǒng)可運(yùn)行2 塊16 x 16 cm 凝膠或4 塊7.5 x 10 cm 凝膠
- 可選擇的MacMelt 或WinMelt 軟件優(yōu)化了GC 夾及引物的置放
DGGE 的兩種模式。A ，凝膠的變性梯度方向與電泳方向垂直。從原生乳腺癌種擴(kuò)增的p53 基因6 號(hào)外顯子的野生型和突變型等位基因通過(guò)垂直DGGE（80V，56°C，2 小時(shí)）分離。感謝AL Borresen, Radium Hospital, Oslo, Norway 提供的數(shù)據(jù)。B ，凝膠的變性梯度方向與電泳方向平行。p53 基因8 號(hào)外顯子的野生型和突變型等位基因在8%丙烯酰胺：甲叉37.5：1 平行梯度（40–65% 變性劑）凝膠上，1 x TAE 緩沖液， 60°C，150 V，電泳2.5 個(gè)小時(shí)。左泳道，突變型等位基因；中，野生型等位基因；右，突變型與野生型等位基因。
DGGE分離示意圖。所示為一個(gè)變性梯度方向與電泳方向垂直的凝膠，以及一個(gè)有單個(gè)熔解區(qū)域的目標(biāo)序列。野生型和突變型樣品加入到制備孔內(nèi)。在低變性劑濃度時(shí)，DNA的片段為雙鏈，但當(dāng)濃度增加時(shí)雙鏈DNA 開(kāi)始熔解，形成分枝分子。到濃度非常高時(shí)，DNA的片段可熔解形成2條單鏈。
